产品目录

本试剂盒专用于从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化微量DNA片段。采用特殊的吸附膜，从琼脂糖凝胶中快速纯化50bp～50kb的DNA片段，洗脱体积最小可低至10μL，可获得高纯度、高浓度，完整性好的DNA，回收率高达90%。本试剂盒回收纯化的DNA可直接用于测序、连接和转化、酶切、标记、体外转录等分子生物学实验。

• 适用范围广，回收效率高，对于50bp～50kb之间的DNA片段，回收效率在90%以上。
  
• 洗脱体积小，可回收纯化微量DNA片段。

• 自备试剂：无水乙醇、异丙醇等。
  
• 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer W中加入无水乙醇。密封于室温保存。
  
• 使用前请检查Buffer G是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴至澄清后使用。
  
• 提前将水浴锅调至50℃备用。

• 将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入干净的离心管（自备）中，称取重量。
  
  • 若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。
• 向胶块中加入3倍体积Buffer G；当琼脂糖凝胶浓度＞2%时，建议使用6倍体积Buffer G（如凝胶重为100mg，其体积可视为100μL，依此类推）。
  
• 50℃孵育10分钟，其间不断温和地上下颠倒离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些Buffer G或继续放置几分钟，直至胶块完全溶解。
  
  • 在胶充分溶解后检测pH值，若pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10～30μL的3M醋酸钠（pH5.0）将pH值调到5～7。
• 加入1倍胶体积异丙醇，上下颠倒混匀（如凝胶为100mg，则加入100μL异丙醇）。
  
• 柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱中加入200μL Buffer S，12000rpm（~13400g）离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 将步骤4中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
  
  • 如果溶胶液总体积大于700μL，则每次使用700μL，多次上柱。
• 吸附柱中加入500μL Buffer G，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入650μL Buffer W，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中Buffer W首次使用前请检查溶液是否已加入正确量的无水乙醇。
  
  • 如果纯化的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer W后静置2～5分钟再离心。
• 将空吸附柱和收集管放入离心机，12000rpm离心2min。
  
  • 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
• 将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入10μL Buffer B，室温静置1～2min，12000rpm离心1min。将所得到的DNA溶液置于-20℃保存或用于后续试验。
  
  • 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0～8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。
    
  • 为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，重复步骤10。
    
  • 洗脱体积不应小于10μL，体积过少会影响回收效率。
    
  • 回收大于10kb的DNA片段时，Buffer B应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。